人原代臍動脈外膜成纖維細胞專用培養基

人原代臍動脈外膜成纖維細胞培養基由團隊精心優化，經過長期測試，本產品可保持人原代臍動脈外膜成纖維細胞優良的生長狀態。

本產品中已包含人原代臍動脈外膜成纖維細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代臍動脈外膜成纖維細胞的培養。

注意事項

僅限科研用。

培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養基，放入 37℃水浴鍋中預熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養基重懸細胞后，轉入 T-25 細胞培養中，混勻后轉入

CO2 培養箱中培養靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，收集瓶內的培養基；

3) 向培養瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養瓶，使PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養瓶中加入 1ml 繼續消化 2min 左右，輕拍培養瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養瓶，各加入 4ml培養基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養瓶，每個培養瓶各 1ml；

9) 水平放置培養瓶，震蕩混勻后，將培養瓶置于 37℃，5%CO2培養箱中靜置培養。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細胞培養需在無菌環境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環氧乙烷滅菌或購買已滅菌產品。

?試劑選擇?：所用培養液、血清、緩沖液等試劑應無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養液成分要求有差異，應按細胞類型選擇合適培養液。

?培養條件?：多數哺乳動物細胞適宜培養溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃。培養箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養通常需5%CO2以維持培養液pH值穩定。培養箱內濕度應保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態、生長狀態與培養液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

HIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha 0.5mgHIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha) 缺氧誘導因子2α 抗原

AZGP1 Protein Human 重組人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 蛋白 (His 標簽)

CST3重組大鼠 Cystatin C / CST3 蛋白 (His 標簽) Protein

CD6 Protein Mouse 重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白

DAPK3重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽) Protein

大鼠核因子κB(NF-κB)試劑盒 ，英文名： NF-κB ELISA Kit

Rabbit pigme epithelium derived factor (PEDF) ELISA Kit 兔色素上皮衍生因子(PEDF)試劑盒

綠膿桿菌(PA)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMouseai-redcellaibodyELISAKit小鼠抗紅細胞抗體

體液肌酸激酶同工酶混合型(CK-MB)活性酶連續循環比色法定量試劑盒20次

ELISAKitTGF-β1犬轉移生長因子β1

豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISAKit   ELISA. 

豬熱休克蛋白20(HSP-20)ELISAKit   ELISA. 

豬C反應蛋白(CRP)ELISAKit   ELISA. 

豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISAKit   ELISA.

豬肉毒堿脂酰轉移酶(CACT)試劑盒

Human kallikrein 8 (KLK 8) ELISA Kit 人8(KLK 8)試劑盒

guineapigIerleukin6,IL-6ELISAKit 豚鼠白介素6(IL-6)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforANGIIR-1(HumanangiotensionIIreceptor1)ELISAKit人血管緊張素Ⅱ受體1

血液脯肽酶(prolidase;PLD)克林納(Chinard)比色法定量試劑盒20次

Porcinediamineoxidase,DAOELISAKit豬氧化酶(DAO)試劑盒

NT5D1蛋白抗體

線粒體核糖體蛋白L10抗體

人原代臍動脈外膜成纖維細胞專用培養基CST3重組大鼠 Cystatin C / CST3 蛋白 (His 標簽) Protein

HIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha 0.5mgHIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha) 缺氧誘導因子2α 抗原

DAPK3重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽) Protein

AZGP1 Protein Human 重組人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 蛋白 (His 標簽)

CD6 Protein Mouse 重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白